1 目的：建立層析上樣崗位操作規(guī)程，規(guī)范崗位操作。 2 范圍：適用于層析上樣崗位。 3 職責(zé)：層析上樣操作人員。 4 內(nèi)容： 4.1 準(zhǔn)備工作 

4.1.1 檢查層析柱、中轉(zhuǎn)桶、脫鹽罐、超濾器是否處于備用或已安裝。 4.1.2 檢查設(shè)備是否已清潔。 4.2 溶液的配置 

4.2.1 平衡液：稱(chēng)取12000-12100g Tris，溶于5000L低溫純化水中，開(kāi)攪拌，當(dāng)緩沖液溫度≤8℃時(shí)，再用鹽酸調(diào)PH**9.05-9.35。 

4.2.2 洗脫液：稱(chēng)取50000-50100g氯化鈉,溶于5000L已配置好的平衡緩沖液中，開(kāi)啟攪拌，將溶液溫度控制在0-4℃左右。 

4.2.3 上樣液：脫鹽罐內(nèi)體積、電導(dǎo)合格后，打開(kāi)平衡液進(jìn)料閥將體積補(bǔ)加到500±20升，再用5M 氫氧化鈉調(diào)PH**9.05-9.35，取樣檢測(cè)物料的蛋白含量及其活性。配制好的上樣液電導(dǎo)值應(yīng)不高于1100μs/cm，保持上樣液的溫度在0-8℃。 4.3 上樣 

4.3.1 打開(kāi)層析柱平衡液進(jìn)液閥，層析柱出液閥，打開(kāi)平衡液中轉(zhuǎn)泵電源開(kāi)關(guān)，平衡液沖洗柱床約3個(gè)體積，流速2.5-3.0L/min流出液檢測(cè)、PH值9.05-9.35， 

4.3.2 平衡結(jié)束后，關(guān)閉層析柱平衡液進(jìn)料閥，平衡液中轉(zhuǎn)泵，打開(kāi)層析柱上樣液進(jìn)料閥，上樣液中轉(zhuǎn)泵電源開(kāi)關(guān)，開(kāi)始上樣，流速2.5-3.0L/min。上樣液經(jīng)層析柱分離，流出液每160-200升檢測(cè)蛋白含量和胰、糜蛋白酶活性。上樣過(guò)程中及時(shí)調(diào)穿柱峰的pH值為2.0-3.0。 

4.3.3 上樣全部泵入層析柱后,關(guān)閉上樣液進(jìn)料閥，關(guān)閉上樣液中轉(zhuǎn)泵電源開(kāi)關(guān)，打開(kāi)層析柱平衡液進(jìn)液閥，打開(kāi)平衡液中轉(zhuǎn)泵電源開(kāi)關(guān)，繼續(xù)用平衡液沖洗柱床，流速2.5-3.0L/min, 收集流出液, 檢測(cè)流出液蛋白含量小于1mg/ml時(shí)停止收集，按實(shí)際流速計(jì)算時(shí)間沖洗250升平衡液。 

4.3.4 洗柱結(jié)束后, 關(guān)閉層析柱平衡液進(jìn)料閥，平衡液中轉(zhuǎn)泵，打開(kāi)層析柱洗脫液進(jìn)液閥，打開(kāi)洗脫液中轉(zhuǎn)泵開(kāi)關(guān)，用洗脫液沖洗柱床,流速2.5-3.0L/min,收集洗脫流出液同時(shí)取樣檢測(cè)蛋白含量和胰、糜蛋白酶活性洗脫液蛋白低于1mg/ml時(shí)停止洗脫和洗脫液收集，洗脫過(guò)程中及時(shí)調(diào)洗脫峰的pH值為2.0-3.0。 4.4 濃縮脫鹽 

4.4.1 收集的穿柱峰，使用蠕動(dòng)泵中轉(zhuǎn)到濃縮罐內(nèi)，打開(kāi)濃縮罐罐底閥門(mén)；打開(kāi)超濾器進(jìn)液閥門(mén)；打開(kāi)超濾器回流閥門(mén)和廢液閥門(mén)，開(kāi)啟超濾器進(jìn)料泵電源開(kāi)關(guān)，通過(guò)控制超濾器回流閥門(mén)開(kāi)關(guān)將壓力控制在0.05-0.1Mpa之間，檢測(cè)廢液排除蛋白含量在5mg/ml以下，否則檢測(cè)超濾器心是否泄漏。廢液通過(guò)管道排放到下水道。 

4.4.2 當(dāng)濃縮罐內(nèi)濃縮液蛋白含量達(dá)到50-60mg/ml濃縮完成，將回流閥門(mén)回流到中專(zhuān)桶內(nèi)，為胰蛋白酶凍干液。 

4.4.3 收集的洗脫峰，使用蠕動(dòng)泵中轉(zhuǎn)到濃縮罐內(nèi)，打開(kāi)濃縮罐罐底閥門(mén)；打開(kāi)超濾器進(jìn)液閥門(mén)；打開(kāi)超濾器回流閥門(mén)和廢液閥門(mén)，開(kāi)啟超濾器進(jìn)料泵電源開(kāi)關(guān)，通過(guò)控制超濾器回流閥門(mén)開(kāi)關(guān)將壓力控制在0.05-0.1Mpa之間，檢測(cè)廢液排除蛋白含量在5mg/ml以下，否則檢測(cè)超濾器心是否泄漏。廢液通過(guò)管道排放到下水道。當(dāng)脫鹽罐內(nèi)體積在80-120升時(shí)檢測(cè)電導(dǎo)率，打開(kāi)脫鹽罐脫鹽液進(jìn)料閥門(mén)，加入脫鹽液180-220升。4.4.4 重復(fù)上一步，當(dāng)電導(dǎo)率低于1200us/cm時(shí)，控制體積在80-120升完成，將回流閥門(mén)回流到中專(zhuān)桶內(nèi)，為糜蛋白酶凍干液。 4.4.5 將胰凍干液于糜凍干液與凍干進(jìn)料人員交接。